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研究普洱茶中黄酮类化学成分

摘要:目的: 研究普洱茶Camellia sinensis var. assamica中黄酮类化学成分。 方法:利用各种色谱技术进行分离,利用波谱方法结合化合物的理化性质确定结构。 结果:最终分离、鉴定了11个黄酮类化合物,分别为:山柰酚(1),槲皮素(2),山柰酚,3-O,,D-葡萄糖

 目的: 研究普洱茶Camellia sinensis var. assamica中黄酮类化学成分。

方法:利用各种色谱技术进行分离,利用波谱方法结合化合物的理化性质确定结构。

结果:最终分离、鉴定了11个黄酮类化合物,分别为:山柰酚(1),槲皮素(2),山柰酚,3-O,β,D-葡萄糖苷(3),山柰酚,3-O,β,D-芸香糖苷(4),芹菜素6-C,α,L-阿拉伯糖,8-C,β,D-葡萄糖苷(5),牡荆素,4″-O,β,D-葡萄糖苷(6),山柰酚,3-O,α,L-鼠李糖基(1→3)α,L-鼠李糖基(1→6)β,D-葡萄糖苷(7),槲皮素,3-O,β,D-葡萄糖苷(8),芦丁(9),槲皮素,3-O,α,L-鼠李糖苷(10),杨梅素,3-O,β,D-葡萄糖苷(11)。

结论:化合物5~7,10,11均首次从普洱茶中分离得到。

普洱茶是以云南特有的大叶茶Camellia sinensis(L.) var. assamica (Masters) Kitamura的晒青毛茶为原料,在高温高湿的环境下,利用微生物经特殊后发酵工艺生产而成的一种黑茶。普洱毛茶制成后,因其后期处理工序的关系可分为“生茶”和“熟茶”,生茶是指不经过渥堆发酵工序的普洱毛青,直接陈放让其自然红转成熟。“生茶”的转熟是完全依靠自然的环境条件,其间的变化相当缓慢,完全稳熟后的生茶,其陈香中仍留活泼生动的韵致,且逾时越久,其内香及活力亦越稳健、显露。“熟茶”是普洱毛茶再经加水,渥堆,翻堆,装袋,出袋,晒干等工序,让其快速红转而成。“熟茶”成熟后,仍需经一段时间的存放,以待其味质稳定,因熟茶堆闷红转过程较为急速,故其气韵味质较生茶平淡。现在所称之的普洱茶都是指经过现代“渥堆”工艺发酵的普洱熟茶,且市面上流通的普洱茶也是指此。

《本草纳目拾遗》记载:“普洱茶膏,黑如漆,醒酒第一,绿色更加;消食化痰,去淤,清胃生津”。现代临床研究也发现普洱茶具有很好的降脂降糖功效。目前,对于山茶科的茶叶的化学成分研究已经很多,但是对于普洱茶化学成分研究报道较少,主要发现普洱茶中含有带内酯环的儿茶素类衍生物[1]。为了进一步阐明普洱茶的物质基础,并为茶叶化学分类提供依据,本课题利用各种色谱、波谱技术对普洱茶的化学成分进行了系统研究,本文主要报道分离鉴定的11个黄酮类化合物。

1 材料

1H 和13C,NMR谱用BrukerAM,500 NMR谱仪以TMS为内标在DMSO-d2和丙酮-d2中测定。质谱用Agilent 6320 Ion Trap LC,MS质谱仪测定。柱色谱分离用填充剂有Sephadex LH,20,硅胶(100~200,200~300目),Merck C18填料。以预制硅胶板进行TLC 检测,以FeCl3和H2SO4香草醛为显色剂。

普洱茶由大叶种的晒青毛茶后发酵制得,云南省龙生普洱茶有限公司提供,由北京大学医学部屠鹏飞教授鉴定为山茶科山茶属植物普洱茶C.sinensis var. assamica成熟叶片的后发酵熟茶,标本存放于北京大学中医药现代研究中心标本室。

2 提取与分离

取普洱茶1.5 kg,用15倍量90 ℃水提取3次,每次30 min,提取液经过浓缩,喷雾干燥得到600 g普洱茶粉,用水混悬溶解后,依次用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取。取乙酸乙酯层萃取物(140 g),经硅胶柱色谱(氯仿,甲醇30∶1~2∶1)梯度洗脱划分为Fr.1,10共10个组分。Fr.2(5 g)析出黄色结晶,重结晶(氯仿,甲醇1∶1) 得化合物1(104 mg)。Fr.3(12.3 g)经硅胶柱色谱(氯仿,甲醇20∶1)和Sephadex LH,20(甲醇)分离纯化得化合物2(22 mg),3(34 mg)。Fr.4(7.1 g)经Sephadex LH,20(甲醇)和C18反相柱色谱(70%甲醇)分离纯化得化合物4(17 mg),5(21 mg)。Fr.5(3.2g)经Sephadex,LH,20(30%丙酮)分离纯化得化合物6(11 mg)。Fr.6(9.8 g)经Sephadex LH,20(30%~50%丙酮)梯度洗脱和C18反相柱色谱(10%~30%甲醇)梯度洗脱分离纯化得化合物7(30 mg)。Fr.7(2.1g)经过Sephadex LH,20(50%甲醇)和半制备HPLC(乙腈,水13∶87)分离纯化得化合物8(3 mg),9(3 mg),10(8 mg)和11(8 mg)。

3 结构鉴定

化合物1 黄色粉末,三氯化铁,铁氰化钾反应显蓝色,硫酸香草醛反应显黄色,显示为黄酮类化合物,ESI,MS m/z 285[M-H]-,经过与对照品TLC对照,3种展开条件下Rf相同,故鉴定该化合物为山柰酚。

化合物2 黄色粉末,三氯化铁,铁氰化钾反应显蓝色,硫酸香草醛反应显黄色,显示为黄酮类化合物。ESI,MS m/z 301[M+H]+;1H,NMR(DMSO-d6,300 MHz) δ: 6.17(1H,d,J=2.0 Hz,H,6),6.40(1H,d,J=2.0 Hz,H,8),6.89(1H,d, J=8.5 Hz,H,5′),7.52(1H,dd,J=2.5,8.5 Hz,H,6′),7.67(1H,d,J=2.5 Hz,H,2′)。以上数据与文献[2]报道的槲皮素数据一致。

化合物3 黄色粉末,三氯化铁,铁氰化钾反应显蓝色,硫酸香草醛反应显黄色,显示为黄酮类化合物。ESI,MS m/z 447[M-H]-,471[M+Na]+;1H,NMR(DMSO-d6,300 MHz) δ: 6.17(1H,d,J=2.0 Hz,H,6),6.40(1H,d,J=2.0 Hz,H,8),8.05(2H,d,J=8.5 Hz,H,2′,6′),6.89(2H,d,J=8.5 Hz,H,3′,5′),5.44(1H,d,J=7.6 Hz,H,1″),5.38(1H,m,H,3″),4.29(1H,br,H,2″),5.09(1H,m,H,6″a),4.95(1H,m,H,6″b)。以上数据与文献[2]报道的山柰酚,3-O,β,D-葡萄糖苷基本一致。


化合物4 黄色粉末,三氯化铁,铁氰化钾反应显蓝色,硫酸香草醛反应显黄色,显示为黄酮类化合物。ESI,MS m/z 595[M+H]+;1H,NMR(methanol-d4,500 MHz) δ: 6.20(1H,d,J=2.0 Hz,H,6),6.40(1H,d,J=2.0 Hz,H,8),8.05(2H,d,J=8.5 Hz,H,2′,6′),6.89(2H,d,J=8.5 Hz,H,3′,5′),5.12(1H,d,J=7.6 Hz,H,1″),4.50(1H,s,H,1),1.11(3H,d,J=8.0 Hz,H,6);13C,NMR(methanol-d4,125MHz)δ: 158.6(C,2),135.6(C,3),179.5(C,4),161.5(C,5),100.0(C,6),166.0(C,7),94.9(C,8),159.5(C,9),105.7(C,10),122.8(C,1′),132.4(C,2′),116.2(C,3′),161.5(C,4′),116.2(C,5′),132.4(C,6′),104.6(C,1″),75.8(C,2″),78.2(C,3″),72.4(C,4″),77.3(C,5″),68.6(C,6″),102.4(C,1),72.1(C,2),71.5(C,3),74.0(C,4),69.7(C,5),17.9(C,6)。以上数据与文献[2]报道的山柰酚,3-O,β,D-芸香糖苷基本一致。

化合物5 黄色粉末,三氯化铁,铁氰化钾反应显蓝色,硫酸香草醛反应显黄色,显示为黄酮类化合物,ESI,MS m/z 563[M-H]-;1H,NMR(DMSO-d6,500 MHz) δ: 6.62(1H,s,H,2),6.93(2H,d,J=8.5 Hz,H,3′,5′),7.98(2H,d,J=8.5 Hz,H,2′,6′),5.02(1H,d,J=9.5 Hz,H,1″);4.87(1H,J=9.5 Hz,H,1);13C,NMR(DMSO-d6,125 MHz)δ: 166.7(C,2),103.6(C,3),184.3(C,4),160.4(C,5),108.4(C,6),162.9(C,7),105.8(C,8),157.5(C,9),103.6(C,10),123.5(C,1′),130.2(C,2′),117.0(C,3′),162.8(C,4′),117.0(C,5′),130.2(C,6′),76.5(C,1″),71.2(C,2″),75.2(C,3″),70.4(C,4″),72.0(C,5″),75.0(C,1),73.1(C,2),80.2(C,3),72.4(C,4),83.0(C,5),63.0(C,6)。以上数据与文献[3]报道的芹菜素,6-C,α,L-阿拉伯糖,8-C,β,D-葡萄糖苷基本一致。

化合物6 黄色粉末,三氯化铁,铁氰化钾反应显蓝色,硫酸香草醛反应显黄色,显示为黄酮类化合物。ESI,MS m/z 593[M-H]-;1H,NMR(DMSO-d6,500 MHz) δ: 6.74(1H,s,H,3),6.24(1H,s,H,6),8.05(2H,d, J=8.5 Hz,H,2′,6′),6.89(2H,d,J=8.5 Hz,H,3′,5′),5.13(1H,d,J=10.0 Hz,H,1″),4.78(1H,d,J=10.0 Hz,H,1);13C,NMR(DMSO-d6,125 MHz)δ: 165.5(C,2),103.0(C,3),182.4(C,4),161.6(C,5),98.6(C,6),161.0(C,7),105.6(C,8),156.7(C,9),104.1(C,10),122.1(C,1′),129.3(C,2′),116.1(C,3′),149.7(C,4′),116.3(C,5′),129.3(C,6′),82.2(C,1″),70.6(C,2″),71.9(C,3″),81.7(C,4″),78.9(C,5″) ,61.1(C,6),103.0(C,1),74.8(C,2),76.5(C,3),69.9(C,4),76.7(C,5),60.6(C,6)。以上数据与文献[4]报道的牡荆素,4″-O,β,D-葡萄糖苷基本一致。

化合物7 黄色粉末,三氯化铁,铁氰化钾反应显蓝色,硫酸香草醛反应显黄色,显示为黄酮类化合物。ESI,MS m/z 739[M-H]-;1H,NMR(DMSO-d6,500 MHz) δ: 6.15(1H,d,J=2.0 Hz,H,6),6.34(1H,d,J=2.0 Hz,H,8),7.97(2H,d,J=8.5 Hz,H,2′,6′),6.88(2H,d,J=8.5 Hz,H,3′,5′),5.25(1H,d,J=7.5 Hz,H,1″) ,4.37(1H,s,H,1),4.71(1H,s,H,1″″) ;13C,NMR(DMSO-d6,125 MHz)δ: 157.1(C,2) ,133.8(C,3),177.5(C,4),161.6(C,5),99.7(C,6),166.2(C,7),94.5(C,8),157.1(C,9),103.8(C,10),121.3( C,1′),131.3(C,2′) ,115.6(C,3′),160.5(C,4′),115.6(C,5′),131.3(C,6′),102.8(C,1″),76.1(C,2″),76.8(C,3″),71.3(C,4″),74.6(C,5″),67.9(C,6″),101.4(C,1),70.8(C,2),78.4(C,3),71.0(C,4),68.9(C,5),18.2(C,6),103.8(C,1″″),70.4(C,2″″),70.5(C,3″″),72.5(C,4″″),68.7(C,5″″),18.0(C,6″″) 。以上数据与文献[5]报道的山柰酚,3-O,α,L-鼠李糖基(1→3)-α,L-鼠李糖基(1→6)β,D-葡萄糖苷一致。


化合物8 黄色粉末,三氯化铁,铁氰化钾反应显蓝色,硫酸香草醛反应显黄色,显示为黄酮类化合物,ESI,MS m/z 463[M-H]-;1H,NMR(methanol-d4,500 MHz) δ: 6.19(1H,d,J=2.1 Hz,H,6),6.39(1H,d,J=2.1 Hz,H,8),7.56( 1H,d,J=8.5 Hz,H,5′),7.58( 1H,d,J=8.5 Hz,H,6′),7.70( 1H,d,J=2.2 Hz,H,2′),5.25( 1H,d,J=7.5 Hz,H,1″);13C,NMR(methanol-d4,125 MHz) δ:158.5(C,2),135.6(C,3),179.5(C,4),163.0(C,5),99.9(C,6),166.0(C,7),94.7(C,8),159.0(C,9),105.7(C,10),123.1(C,1′),116.0(C,2′),149.9(C,3′),145.9(C,4′),117.6(C,5′),123.2(C,6′),104.3(C,1″),75.7(C,2″) ,78.4(C,3″) ,71.2(C,4″) ,78.1(C,5″) ,62.6(C,6″)。以上数据与文献[3]报道的槲皮素,3-O,β,D-葡萄糖苷一致。

化合物9 黄色粉末,三氯化铁,铁氰化钾反应显蓝色,硫酸香草醛反应显黄色,显示为黄酮类化合物。ESI,MS m/z 609[M-H]-;1H,NMR(DMSO-d6,500 MHz) δ: 6.19(1H,d,J=2.1 Hz,H,6),6.39(1H,d,J=2.1 Hz,H,8),6.98( 1H,d,J=9.5 Hz,H,5′),7.52( 1H,d,J=9.5 Hz,H,6′),7.55( 1H,d,J=2.2 Hz,H,2′),5.35(1H,d,J=7.5 Hz,H,1″),4.38( 1H,d,J =1.2 Hz,H,1);13C,NMR(DMSO-d6,125 MHz) δ: 156.4(C,2),133.3(C,3),177.4(C,4),161.2(C,5),98.7(C,6),164.4(C,7),93.6(C,8),156.6(C,9),103.8(C,10),121.2(C,1′),115.3(C,2′),148.5(C,3′),144.8(C,4′),116.3(C,5′),121.6(C,6′),100.8(C,1″),74.1(C,2″),76.5(C,3″),70.6(C,4″),75.9(C,5″),67.0(C,6″),101.2(C,1),70.0(C,2),70.4(C,3),71.9(C,4) ,68.3(C,5) ,17.7(C,6) 。以上数据与文献[6]报道的芦丁一致。

化合物10 黄色粉末,三氯化铁,铁氰化钾反应显蓝色,硫酸香草醛反应显黄色,显示为黄酮类化合物。ESI,MS m/z 447[M-H]-;1H,NMR(DMSO-d6,500 MHz) δ: 6.18(1H,d,J=1.8 Hz,H,6),6.38(1H,d,J=1.8 Hz,H,8),6.87(1H,d,J=8.0 Hz,H,5′),7.50(1H,dd,J=8.0,2.0 Hz,H,6′),7.63(1H,d,J=2.0 Hz,H,2′),5.24(1H,d,J=2.0 Hz,H,1″),1.05(3H,d,J=6.0 Hz,H,6″)。以上数据与文献[7]报道的槲皮素,3-O,α,L-鼠李糖苷一致。

化合物11 黄色粉末,三氯化铁,铁氰化钾反应显蓝色,硫酸香草醛反应显黄色,显示为黄酮类化合物。ESI,MS m/z 479[M-H]-;1H,NMR(DMSO-d6,500 MHz) δ: 6.19(1H,d,J=1.8 Hz,H,6),6.35(1H,d,J =1.8 Hz,H,8),7.20(1H,d,J =2.0 Hz,H,2′,6′),5.45(1H,d,J =7.5 Hz,H,1″)。以上数据与文献[8]报道的杨梅素,3-O,β,D-葡萄糖苷一致。

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Chemical constitutes of flavones from Pu,erh tea

ZHANG Liang, TU Peng,fei*

(State Key Laboratory of Natural and Biomimetic Drugs, Peking University School of

Pharmaceutical Sciences, Beijing 100191, China)

[Abstract]The chemical constituents in the Pu,erh tea were isolated by various column chromatographic methods, and their structures were identified by spectral data and physic,chemical analysis. As a result, eleven flavonoids were isolated and identified as kaempferol (1), quercetin (2), kaempferol,3-O,β,D-glucopyranoside (3), kaempferol,3-O,β,D-rutinoside (4), apigenin,6-C,α,L-arabinopyranosyl,8-C,β,D-glucopyranoside (5), vitexin,4″-O,β,D-glucopyranoside (6), kaempferol,3-O,[α,L-rhamnopyranosyl,(1→3)-α,L-rhamnopyranosyl,(1→6)-β,D-glucopyranoside] (7), quercetin3-O,β,D-glucopyranoside (8), rutin (9), quercetin,3-O,α,L-rhamnopyranoside (10), and myricetin,3-O,β,D-glucopyranoside (11). Compounds 5,7, 10 and 11 were isolated from Pu,erh tea for the first time.

[Key words]Camellia sinensis var. assamica; flavones; chemical constituents

doi:10.4268/cjcmm20131020

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